厭氧培養(yǎng)箱的氧氣置換是一個關(guān)鍵步驟，以確保培養(yǎng)箱內(nèi)部形成無氧或低氧環(huán)境，從而滿足厭氧微生物的生長需求。以下是一個詳細的置換氧氣步驟：

一、準備階段

1. 放置附件和器具：按使用要求放置好必要的附件和器具。
2. 開啟電源和照明：通電源開照明燈，開啟溫控儀，調(diào)節(jié)至所需溫度。
3. 放入干燥劑和指示紙：在操作室內(nèi)放入干燥劑和美蘭指示紙（封閉狀態(tài)），用于檢測氧氣含量和濕度。

二、氮氣置換階段

1. 密封手套：將乳膠手套套在觀察板法蘭圈上并扎緊，以防止氣體泄漏。
2. 氮氣進氣：接通氮氣進氣路，打開氮氣控制閥，使手套鼓起，然后關(guān)閉閥門，并再次扎緊袋口。
3. 重復(fù)置換：重復(fù)上述充氮過程，至少進行兩次氮氣置換。每次置換前，應(yīng)確保取樣室先抽真空，并用腳踏開關(guān)開閉排氣。

三、混合氣體置換階段

1. 調(diào)整混合氣體：混合氣體通常包含氮氣（N2）、氫氣（H2）和二氧化碳（CO2），按一定比例（如N2 85%、H2 10%、CO2 5%）混合。
2. 混合氣體進氣：調(diào)換氣路，打開混合氣閥進氣。充氣時，取樣室應(yīng)先抽真空，并隨時用腳踏開關(guān)開閉排氣。
3. 調(diào)整流量計：關(guān)掉混合氣體閥后，打開另一閥門，使混合氣體經(jīng)過流量計。調(diào)整流量計，使流量控制在每分鐘10ml左右。
4. 重復(fù)置換：重復(fù)上述混合氣體置換過程2~3次，以確保操作室內(nèi)形成穩(wěn)定的厭氧環(huán)境。

四、后續(xù)處理

1. 催化除氧：打開操作室內(nèi)的除氧催化器電源，進行催化除氧。一小時后，打開美蘭指示紙觀察其顏色變化，如不變色則表明操作室內(nèi)已達到厭氧環(huán)境。
2. 滅菌處理：開啟紫外線燈，對操作室內(nèi)進行滅菌處理。滅菌時間可根據(jù)具體實驗要求自定。

五、注意事項

1. 氣體壓力控制：在置換過程中，應(yīng)嚴格控制氣體的輸入壓力，以防爆管或損壞設(shè)備。
2. 定期檢查：連續(xù)使用厭氧培養(yǎng)箱時，應(yīng)定期檢查和補充除氧劑和干燥劑，確保室內(nèi)厭氧條件的維持。
3. 安全操作：在操作過程中，應(yīng)嚴格遵守安全操作規(guī)程，防止氣體泄漏或設(shè)備損壞。

通過以上步驟，可以有效地將厭氧培養(yǎng)箱內(nèi)的氧氣置換出去，為厭氧微生物的生長提供一個適宜的無氧或低氧環(huán)境。